蛋白质和核酸检测

蛋白质和核酸检测

与其他方法相比,以微孔板形式来定量核酸和蛋白可提供更高的通量并实现结果的自动计算。

精确获取核酸浓度和纯度对于分子生物学和遗传学中的许多实验来说是必不可少的工作。初始 DNA 或 RNA浓度和纯度对qPCR、分子克隆、鉴定和新一代测序等技术影响很大。在某些情况下,例如采用已降解样品进行检测或进行鉴定工作时,非常少量的样品中获得准确的测定结果是非常重要的。理想的 DNA/RNA 定量仪器需要非常灵敏,足以在样本量极低的情况下就可以满足检测需求,并且方法适用于高通量检测。有两种核酸定量方法被广泛使用:分光光度计数值检测样品的光吸收值,通常使用比色皿针对一个样品进行检测,但也可放在微孔板中进行检测;采用与核苷酸产生反应的荧光染料,它是用于以微孔板形式进行高通量检测的最佳选择。

蛋白和核酸检测的技术

  • DNA/RNA 定量

    DNA/RNA 定量

    在分光光度计或微孔板酶标仪(读板机)上测得的 DNA 样品在 260nm 处的吸光度可用于计算其浓度。吸光度定量适用于浓度介于大约 0.25ug/mL 至大约 125ug/mL 的微孔板形式样品。部分仪器可对体积低至 2uL 的极少量样品进行定量。需要更高的灵敏度时,荧光方法可检测低至几个皮克的 DNA。

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  • 支原体检测

    支原体检测

    支原体是最小且最简单的原核生物,也是细胞培养物中常见的污染物。支原体污染的征兆主要有细胞增殖率降低以及包括基因表达在内的细胞层面的变化。仅在显微镜下观测细胞培养物并不能检测到支原体,因此已开发了荧光检测和发光检测等各种方法,以使研究者能够监测污染。

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  • 激酶/磷酸酶检测

    激酶/磷酸酶检测

    如今,激酶是药物发现领域中最关键的靶标之一。这些酶是细胞信号传导通路中的关键组分,其功能若遭到破坏就会引发各种疾病,例如代谢疾病、某些癌症和心脏病。功能类似的磷酸酶和磷酸二酯酶也是重要的筛选靶标。

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  • 蛋白定量

    蛋白定量(Bradford、Lowry、BCA、DC)

    蛋白浓度可通过紫外线分光光度计中 280nm 处的吸光度来直接测定,或使用 BCA 或 Bradford 检测等比色测定法来间接测定。由于不需要其他试剂,光吸收法定量非常简便,但比色测定法可在样品非常珍稀的情况下提供更佳的灵敏度,通常情况下此方法作为首选。两种方法都可在紫外可见分光光度计或光吸收功能的微孔读板机(酶标仪)中进行检测。

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  • 酶活性

    酶活性

    酶活性可使用显色底物来进行实时检测,在将显色底物添加至酶时,它的颜色会发生变化,这种变化可在光吸收微孔读板机(酶标仪)上检测。使用具有移液处理功能的仪器可自动添加底物,同时可检测反应,这样就可检测到最早期的反应部分,从而获得更加准确的结合亲和力估值。

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  • 蛋白质印迹检测

    蛋白质印迹检测

    蛋白质印迹检测是用于检测和定量特定蛋白的最常用方法之一。在此方法中,首先在 SDS-PAGE 凝胶上按照大小来分离蛋白样品,例如从细胞裂解物中收集样品。蛋白随后被转移至硝酸纤维素膜或PVDF膜上,可使用对目标蛋白具有特异性识别的抗体进行标记并检测。使用各种技术来检测免疫印迹膜上的蛋白,包括荧光和化学荧光。

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  • 荧光蛋白检测

    荧光蛋白检测

    荧光蛋白作为用于检测生物体内各种反应有力工具深受大家喜爱。除了维多利亚多管发光水母中的绿色荧光蛋白 (GFP) 之外,如今有许多其他来自水母和礁珊瑚等物种的荧光蛋白可供使用。这些蛋白可在各种细胞和生物体中表达,并在其中被用于监测许多细胞生物学过程,包括蛋白质合成和转位、基因诱导,以及进行细胞谱系分析。

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  • SNP 基因分型

    SNP 基因分型

    基因分型是一种通过检测个体的 DNA 序列来分析个体间基因差异的过程。单核苷酸多态性 (SNP) 是最常见的遗传变异类型之一,包含单个核苷酸在特定位点的突变。SNP 基因分型经证明在检测不同物种的疾病相关突变方面非常有用,因此,已开发了许多 SNP 检测技术。

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  • ELISA

    ELISA

    酶联免疫吸附检测 (ELISA) 通常以微孔板形式用于检测特定蛋白的含量,且很多时候通过可见光波长范围内的吸光值来获得其结果。化学发光和荧光 ELISA 形式具有更高的灵敏度,以对少量待检测物质进行精确定量。

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