细胞计数仪
细胞计数仪：HEK293-GFP 细胞
人胎肾 293 细胞也称 HEK293、293 细胞，或叫 HEK 细胞，它是源自人胎肾的一种细胞系。早在二十世纪七十年代，Alex van der Eb 就在他荷兰莱顿大学的实验室分离出了这类细胞，而实验室的另一位成员用腺病毒对细胞进行转化，从而产生了今天使用的细胞系。HEK293 细胞很容易生长和转染，因此它们广泛用于基于转染的实验、蛋白表达以及疫苗生产。我们对使用绿色荧光蛋白（GFP；GenTarget Inc.）进行慢病毒转化的 HEK293 细胞成像，以展现对 SpectraMax MiniMax 300 成像细胞计数器上细胞融合度的分析。
图 1：HEK293-GFP 细胞的 StainFree 检测
使用 SpectraMax i3 MiniMax 300 成像细胞计数器对 HEK293-GFP 细胞进行成像，并使用自定义场分析设置来检测细胞。左图显示的是原始透射光图像，右图显示的是同一个图像，但有紫色图层标记，表明软件检测到的融合区域。
图 2：定义细胞和背景区域
使用 SoftMax Pro 软件中的绘图工具定义图像中的细胞（黄色）和背景（蓝色）区域。
图 3：在 MiniMax 细胞计数器上进行成像的 HEK293-GFP 细胞
HEK293-GFP 细胞按每孔 20000 个、5000 个以及 1250 个细胞接种，并通过 MiniMax 细胞计数器的绿色荧光通道进行成像。
图 4：StainFree 与荧光分析
对比采用 StainFree 分析（蓝色圆圈）和荧光（绿色圆圈）分析测定的融合区域。StainFree 融合度百分比基本与荧光分析的融合度吻合。
提示 1：
有时，细胞会成块，以致于无法单独计数。在这些情况下，可使用 SoftMax Pro 软件中的场分析设置来发现被细胞覆盖的区域，或测定融合度百分比。StainFree 分析可用于通过 TL 通道成像的细胞。对于某些细胞类型，该软件中的预定义细胞设置将自动准确检测细胞覆盖的区域。对于 HEK293，这种预定义设置相当有效，并且可预估融合度，从而达到质量控制目的。
提示 2：
如果需要稍微更准确的融合度估值，可能要采用一种自定义、用户设定的设置。一键得到准确的细胞融合度测量值要使用背景工具，在某些非常靠近融合区域边界但还在其外的区域上绘图。这有助于较大程度减少靠近细胞的区域被算作细胞区域的数量。
HEK293-GFP 细胞分析工具包
- SpectraMax® i3 多功能微孔板检测平台
- SpectraMax® MiniMax™ 300 成像细胞仪
- SoftMax® Pro 软件
仪器设置
分析类型：场分析
发现融合区域所需波长：TL 或 541
关于 StainFree 细胞检测技术
细胞成像检测通常需要借助于荧光染料对细胞标记，但会对活细胞产生毒性，或者仅可用于固定的细胞中使用。用于分析细胞计数和细胞融合度的无标记方法可让研究者定量监测细胞增殖和健康状况，无需进行那些可能会影响细胞活力且耗时的工作流程。
具备 MiniMax 300 成像细胞仪的 SpectraMax i3 多功能微孔板平台采用较独特且StainFree 细胞检测技术，让您能够进行细胞增殖、毒性和其他测定，无需使用可与 DNA 相结合的细胞核染色，如 DAPI，或从长远来看确实会对细胞产生毒性的活细胞染料。