细胞计数仪

细胞计数仪:大鼠主动脉内皮细胞

大鼠主动脉内皮细胞一直被用于各种科学研究,包括细胞-细胞黏附、迁移、血管生成,以及正常和疾病条件下内皮功能涉及的细胞信号转导通路的研究。它们是原代细胞,因此它们在药物筛选中的使用是非常棘手的。在进行测定前,进行活细胞成像和测定细胞融合度对是否成功非常重要。

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图 1. 大鼠主动脉内皮细胞的透射光图像

图像显示了单一原代培养体系中形态学和细胞进程的范围。

图 2. 大鼠主动脉内皮细胞的 StainFree 计数

大鼠主动脉内皮细胞使用 SpectraMax i3 MiniMax 300 成像细胞计数仪进行成像,细胞使用自定义分析设置检测。左图显示的是原始透射光图像(顶部:密度更高的培养物,底部:密度更低的培养物),右图显示的是相同的图像,但有紫色图层,代表软件检测到的细胞。

图像由密苏里州哥伦比亚密苏里大学的 Virginia Huxley 博士惠赠,我们的应用科学家 Randy Milano 提供了帮助。

提示:

对大鼠主动脉内皮细胞进行成像细胞计数会面临挑战,因为它们是扁平细胞,有许多不同的形态,而且有时甚至有很长的进程,会让人联想到神经元生长(如图 1 所示)。这是 StainFree 技术中使用的受监督机器学习算法真正起到用处的地方。在图像分析设置中,选择选项“创建新设置”,将您的制图焦点对准细胞核心,忽略细胞进程(生长)。确保包一些形态不同的代表性细胞,您将获得类似于图 2 中的结果。

有用的提示:将“焦点调节”设置为一个更大的负值,能对这些细胞产生更明显的图像,使软件更容易进行计数。

大鼠主动脉内皮细胞分析工具包

仪器设置

参数
细胞计数设置
光学配置
SpectraMax MiniMax 300 细胞成像系统
读板模式
成像
读板类型
终点法
波长设置
透射光
读板类型
96 孔 Costar 黑壁底透板
图像采集设置

曝光:7 ms

焦点调节:-455 µm(可根据所用细胞的特征进行优化)

图像分析设置

分析类型:离散对象分析

识别对象所需波长:TL

识别对象
设置:创建新设置(见上文提示)

关于 StainFree 细胞检测技术

细胞成像检测通常需要借助于荧光染料对细胞标记,但会对活细胞产生毒性,或者仅可用于固定的细胞中使用。用于分析细胞计数和细胞融合度的无标记方法可让研究者定量监测细胞增殖和健康状况,无需进行那些可能会影响细胞活力且耗时的工作流程。

具备 MiniMax 300 成像细胞仪的 SpectraMax i3 多功能微孔板平台采用较独特且StainFree 细胞检测技术,让您能够进行细胞增殖、毒性和其他测定,无需使用可与 DNA 相结合的细胞核染色,如 DAPI,或从长远来看确实会对细胞产生毒性的活细胞染料。